Pencegahan merupakan langkah yang paling penting dalam pengendalian demam berdarah dengue salah satunya melalui pengendalian vektor. Larvasida hayati yang berasal dari tanaman bioinsektisida merupakan alternatif yang dianggap paling tepat dalam pengendalian vektor. Salah satu tanaman bioinsektida tersebut adalah ruku-ruku (Ocimum sanctum L.). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian minyak atsiri daun Ocimum sanctum L. yang berasal dari Banda Aceh terhadap mortalitas larva Aedes aegypti L. instar III. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimen laboratorium menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 6 perlakuan dan 4 ulangan. Perlakuan terdiri dari minyak atsiri daun Ocimum sanctum L. dengan konsentrasi 125 ppm, 250 ppm, 500 ppm, 1000 ppm, abate sebagai kontrol positif dan akuades sebagai kontrol negatif. Data hasil penelitian dianalisis dengan menggunakan analysis of variance (Anova), uji Duncan dan uji Probit. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian minyak atsiri daun Ocimum sanctum L. dapat menyebabkan kematian larva Aedes aegypti L. instar III dengan Fhitung sebesar 205,847. Hasil analisis probit menunjukkan LC50 dan LC90 minyak atsiri daun Ocimum sanctum L. sebesar 131,331 ppm dan 220,397 ppm. Kesimpulan dari penelitiannya ini adalah minyak atsiri daun Ocimum sanctum L. yang berasal dari Banda Aceh berpengaruh terhadap kematian larva Aedes aegypti L. instar III dan aktif sebagai larvasida. Kata kunci: Minyak atsiri, Ocimum sanctum L., Aedes aegypti, Larvasida