Infeksimenjadipermasalahanbesar didunia, salah satunyainfeksiyangdisebabkan olehStaphylococcus aureus. Pencarianobat-obatandari tumbuhan terusdilakukan,salahsatunyaadalah tumbuhanpala yang bersifat antibakteri.Tujuanpenelitian ini adalah untuk mengetahuipengaruh pemberianminyak atsiribijipala(Myristica fragransHoutt)terhadapStaphylococcus aureus.Penelitian inimenggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL)yangdibagi dalam 6kelompok yaitu4 kelompokperlakuandan 2 kelompok kontrol dengan 4kali pengulangan. PerlakuanP1,P2, P3dan P4terdiri dari minyak atsiribijipala dengan konsentrasi 30%, 50%,70% dan 90%. P0sebagai kontrol negatif menggunakan Tween80danP5sebagaikontrol positif digunakan Amoksisilin 30µg. Uji daya hambat dilakukanmenggunakan metode difusi cakram.Hasil uji menunjukkan bahwaminyak atsiri bijipaladengan konsentrasi 30%, 50%, 70% dan 90% masing-masing mampumembentuk zona hambat rata-rata 7mm,7,87 mm,9,75mm,12mm danpadakontrol positif didapatkan daya hambat27,25 mmterhadapStaphylococcus aureus.Analisis data menggunakan ANOVA (Analysis of Variance) dan dilanjutkan denganUji Beda Nyata Terkecil/BNT (p > 0,05) menunjukkan bahwaminyak atsiri biji palamemiliki aktivitas antibakteri yang bermakna terhadapStaphylococcus aureusdansemakin besar konsentrasiminyak atisiriyang diberikan maka semakin besardiameter zona hambat yang terbentuk.Kata kunci:antibakteri,minyak atsiribijipala,Myristica fragransHoutt,Staphylococcus aureus