ABSTRAK Staphylococcus aureus merupakan penyebab penyakit infeksi. Di Indonesia banyak tumbuhan yang digunakan dalam pengobatan tradisional, salah satunya adalah temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) yang diduga memiliki efek antimikroba. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui adanya aktivitas antimikroba ekstrak etanol temulawak terhadap pertumbuhan bakteri Stahylococcus aureus secara in vitro. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorium menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang terbagi dalam 6 kelompok yaitu 4 kelompok perlakuan dan 2 kelompok kontrol dengan 4 kali pengulangan. Metode yang digunakan adalah metode difusi dengan menggunakan cakram kertas. Masing-masing cakram ditetesi ekstrak temulawak dengan konsentrasi 40%, 60%, 80%, 100%, amoxicillin + clavulanic acid 30 μg dan Carboxyl Methyl Cellulose (CMC) 1%. Parameter yang diamati yaitu luas zona hambat yang terbentuk. Hasil penelitian dari tiap kelompok perlakuan diolah secara statistik dengan menggunakan Analysis of Variance (ANOVA) dan dilanjutkan dengan uji Beda Nyata Jujur (BNJ) pada taraf 0,05. Hasil uji ANOVA menunjukkan adanya perbedaan yang nyata pada perlakuan dalam memberikan daya hambat terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus. Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol temulawak dapat digunakan dalam menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus, semakin tinggi konsentrasi ekstrak etanol temulawak yang diberikan maka semakin besar pula daya hambat yang diperoleh. Kata Kunci : Ekstrak Curcuma xanthorrhiza Roxb., zona hambat, Staphylococcus aureus ABSTRACT Staphylococcus aureus is a causes of infection diseases. In Indonesia, many plant which were used in traditional medicine, one of them is temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) which functions as antimicrobial. This study aim to understand presence of antimicrobial activity of the temulawak ethanol extract on Stahylococcus aureus growth in vitro. The study was laboratory experimental using Complete Randomized Design (CRD) that divided into 6 groups were 4 groups of treatment and 2 groups of control with 4 times refrains. The method used was diffusion by using paper disk. Each of disk was dropped by temulawak extract by concentrations of 40%, 60%, 80%, 100%, amoxicillin + clavulanic acid 30 mg and Carboxyl Methyl Cellulose (CMC) 1%. The observer parameter that was wide blocked zone formed. The result of study of each treatment groups was processed statistically by using Analysis of Variance (ANOVA) and continued by True Significant Different (TSD) at level 0,05. The result of ANOVA test indicated presence of significant difference in the treatment to provide resistibility on Staphylococcus aureus. Based on the result of the study can be concluded that the extract of temulawak ethanol can be used to impede Staphylococcus aureus growth, the higher concentration of temulawak ethanol extract gave so the larger resistibility will be gotten. Keywords: Extract Curcuma xanthorrhiza Roxb., blocked zone, Staphylococcus aureus