ABSTRAK Tanaman Sereh Wangi (Cymbopogon nardus L.) merupakan salah satu tanaman yang memiliki seribu manfaat, terutama dalam pengobatan. Sereh Wangi ini memiliki kandungan minyak atsiri seperti sitronelal dan geraniol yang berfungsi sebagai antibakteri. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas antibakteri minyak atsiri sereh wangi terhadap bakteri Staphylococcus aureus. Jenis Penelitian ini adalah eksperimen laboratorium dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang terdiri dari 4 perlakuan dan 1 kontrol dengan 5 kali pengulangan. Perlakuan terdiri dari konsentrasi minyak atsiri 20%, 30%, 40% dan 50%. Kontrol negatifnya tween 80%. Minyak atsiri sereh wangi diambil dengan metode destilasi air dan uap (pengukusan). Uji antibakteri dilakukan dengan metode difusi cakram Kirby Bauer. Hasil penelitian menunjukkan bahwa minyak atsiri sereh wangi memiliki aktivitas antibakteri pada konsentrasi 20%, 30%, 40% dan 50% terhadap Staphylococcus aureus dengan diameter zona hambat rata-rata berturut-turut 16,6 mm, 20,2 mm, 26,7 mm dan 31 mm. Hasil analisis data dengan menggunakan Analysis Of Variance (ANOVA) dan dilanjutkan dengan Uji Duncan (p< 0.01) yang menunjukkan bahwa minyak atsiri sereh wangi memiliki aktivitas antibakteri yang sangat nyata terhadap Staphylococcus aureus dengan konsentrasi optimal 50%. Kata kunci: Cymbopogon nardus L., aktivitas antibakteri, Staphylococcus aureus