Abstrak Minyak Atsiri merupakan minyak yang dihasilkan dari ekstrak tumbuhan yang bersifat mudah menguap pada suhu kamar dan memiliki bau yang khas sama seperti wangi tanaman penghasilnya. Bunga kenanga merupakan salah satu tumbuhan yang menghasilkan minyak atsiri. Minyak atsiri bunga kenanga memiliki sifat antibakteri karena mengandung komponen aktif berupa kariofilen. Minyak atsiri bunga kenanga di peroleh dari hasil ekstraksi menggunakan penyulingan uap dan air. Pengujian antibakteri dilakukan terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan menggunakan metode difusi cakram dengan menggunakan konsentarsi 200 µL. Rancangan penelitian rancangan acak kelompok (RAK) pola faktorial yang terdiri atas 2 faktor. Faktor pertama adalah jenis bunga (J) terdiri dari tiga taraf yaitu J1 = bunga besar J2 = bunga kecil dan J3= bunga besar dan kecil. Faktor kedua waktu pemetikan (W), yang terdiri atas dua taraf yaituW1 = pagi hari, dan W2 = sore hari. Kombinasi perlakuan dalam penelitian ini adalah 2 × 3 = 6 (enam) kombinasi perlakuan dan menggunakan 3 (tiga) kali ulangan, sehingga diperoleh 18 satuan percobaan. Hasil penelitan menunjukkan bahwa jenis bunga dan waktu pemetikan berpengaruh tidak nyata terhadap rendemen, bobot jenis, indeks bias namun ada interaksi terhadap uji antibakteri. Kata kunci : Bunga Kenanga,Minyak Atsiri Bunga Kenanga, Antibakteri Abstract Essential oil is oil produced from plant extracts which is volatile at room temperature and has a unique fragrant smell as such its plant source. Cananga flower produces essential oil. This oil has antibacterial properties since it containskariofilen. This kind of oil was extracted by using steam and water method. Antibacterial test was conducted against Staphylococcus aureus and Escherichia coli by using disc diffusion method with 200 uL concentration. The research design used a randomized block design (RBD) with factorial pattern containing two factors. The first factor wastype of flower (Cananga) (J) with three levels, namely J1 = big flower, J2 = small flower, J3 = combination of big adn small flowers. The second factor was picking time (W) with two levels; W1 = in the morning, and W2 = in the evening. Combination treatment in this study was 2 × 3 = 6 (six) treatments with three (3) repetitions, thus obtained 18 experimental units. The results showed that the type of flower and picking time had no correlation to the yield, density, refractive index, but they revealed interaction or significant effect on the antibacterial test. Keywords: Cananga flower, Cananga Essential Oil, Antibacterial compound