Daun salam (Syzygium polyanthum [Wight] Walp.) biasa dimanfaatkan sebagai bumbu dapur dan berkhasiat sebagai obat diare. Escherichia coli merupakan salah satu penyebab diare. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh ekstrak etanol daun salam dalam menghambat pertumbuhan Escherichia coli. Jenis penelitian ini adalah eksperimen laboratorium dengan menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) terdiri dari 3 kelompok perlakuan dan 2 kelompok kontrol, masing-masing kelompok diulang sebanyak 5 kali. Kelompok perlakuan terdiri dari ekstrak etanol daun daun salam dengan konsentrasi 50%, 75%, dan 100%, sedangkan kontrol positif digunakan gentamisin dan kontrol negatif digunakan CMC 1%. Uji antimikroba dilakukan dengan metode difusi cakram Kirby Bauer. Parameter yang diamati adalah luas zona hambat yang terbentuk pada media. Data dianalisis secara deskriptif dan disajikan dalam bentuk tabel dan gambar. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun salam dengan konsentrasi 50%, 75%, dan 100% mampu menghambat pertumbuhan Escherichia coli sebesar 7,60 mm, 9,60 mm, dan 11,00 mm. Sementara itu, diameter zona hambat dari Gentamisin sebesar 18,00 mm sedangkan CMC 1% tidak menghasilkan daya hambat. Hasil diatas menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun salam konsentrasi 100% mampu menghambat pertumbuhan Escherichia coli yang dapat digolongkan dalam kategori kuat dan konsentrasi 50%, 75% dapat digolongkan dalam kategori sedang. Gentamisin berdasarkan CLSI dalam menghambat pertumbuhan Escherichia coli yang digolongkan dalam kategori sensitif. Kata kunci: Daun salam, Syzygium polyanthum [Wight] Walp., Escherichia coli.