ABSTRAK Daun sambiloto (Andrographis paniculata Nees) memiliki banyak manfaat, diantaranya sebagai antimikroba. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) merupakan salah satu penyebab infeksi nosokomial. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh ekstrak metanol daun sambiloto dalam menghambat pertumbuhan MRSA. Jenis penelitian ini adalah eksperimental yang menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang dibagi menjadi 7 kelompok. Kelompok perlakuan terdiri dari ekstrak metanol daun sambiloto dengan konsentrasi 5%, 25%, 45%, 65% dan 85%. Kelompok kontrol terdiri dari carboxymethylcellulose 1% sebagai kontrol negatif dan vancomycin 30 µg sebagai kontrol positif. Uji antibakteri dilakukan dengan metode difusi cakram. Hasil uji antibakteri menunjukkan bahwa ekstrak metanol daun sambiloto dengan konsentrasi 5%, 25%, 45%, 65% dan 85% membentuk diameter zona hambat rata- rata 11 ± 0,00 mm, 14,5 ± 0,58 mm, 16 ± 0,82 mm, 17 ± 0,00 mm dan 18,25 ± 0,50 mm. Kontrol negatif menghasilkan zona hambat rata-rata 0 ± 0,00 mm dan kontrol positif menghasilkan zona hambat rata-rata 20 ± 0,00 mm. Hasil uji ANOVA dan uji lanjutan Beda Nyata Jujur (BNJ) pada taraf kritis 1% menunjukkan ekstrak metanol daun sambiloto dengan konsentrasi 5%, 25%, 45%, 65% dan 85% memiliki daya hambat terhadap pertumbuhan MRSA yang berbeda sangat nyata dibandingkan kontrol negatif. Daya hambat ekstrak metanol daun sambiloto konsentrasi 5% dan 25% dapat menghambat pertumbuhan MRSA dengan kategori lemah, sedangkan konsentrasi 45%, 65% dan 85% dapat menghambat dengan kategori sedang. Kata kunci: Andrographis paniculata Nees, MRSA, aktivitas antibakteri ABSTRACT King of bitter’s leaves (Andrographis paniculata Nees) have some of benefits, the other one is as antimicrobial. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) has caused nosocomial infection. This study aimed to find out influence of king of bitter’s leaves methanol extract in inhibit the MRSA’s growth. Kind of this study was experimental that used Completely Randomized Design. This study was devided into 7 groups. Treatment groups were consist of king of bitter’s leaves methanol extract with consentration 5%, 25%, 45%, 65% and 85%. Control groups were consist of carboxymethylcellulose 1% as negative control and vancomycin 30 µg as positive control. Antibacterial test has been done by disc diffusion method. The result of this test showed king of bitter’s leaves methanol extract with consentration 5%, 25%, 45%, 65% and 85% formed avarage inhibition zone diameter 11 ± 0,00 mm, 14,5 ± 0,58 mm, 16 ± 0,82 mm, 17 ± 0,00 mm and 18,25 ± 0,50 mm. Negative and positive control formed average inhibition zone diameter 0 ± 0,00 mm and 20 ± 0,00 mm. The result from ANOVA and Tukey test for level 1% found that king of bitter’s leaves methanol extract with consentration 5%, 25 %, 45%, 65% and 85% have very significant differences inhibiting ability to MRSA’s growth in compared to negative control. King of bitter’s methanol extract leaves at consentration 5% and 25% can inhibit the MRSA’s growth with weak categoty, whereas consenstration 45%, 65% and 85% can inhibit with intermediate category. Keywords: Andrographis paniculata Nees, MRSA, antibacterial activity