ABSTRAK Rumah sakit merupakan suatu institusi pelayanan kesehatan masyarakat yang rentan akan terjadinya pencemaran mikroba dalam udara terutama ruangan NICU. Ruang NICU adalah ruang yang terdapat di dalam rumah sakit yang merupakan sebuah ruang perawatan intensif yang memerlukan pengobatan dan perawatan khusus. Menurut kemenkes tahun 2004 tentang persyaratan kesehatan lingkungan rumah sakit, ditetapkan bahwa angka mikroba udara di ruang NICU dibawah 200 CFU/m3. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui gambaran total colony forming unit di 3 ruang NICU di RSUD dr. Zainoel Abidin Banda Aceh. Penelitian ini bersifat observasional dengan pendekatan cross sectional. Cawan petri berisi diletakkan secara terbuka di ruangan selama 30 menit. Hasil penelitian menunjukkan bahwa dari 3 ruangan yang diperiksa, angka cemaran terendah di ketahui terdapat pada ruang NICU 1 dengan nilai cemaran 10 CFU/m3/ 30 menit sebesar 12 CFU/m3/ 30 menit untuk media agar darah dan 10 CFU/m3/ 30 menit untuk media MacConkey, sedangkan angka cemaran tertinggi terdapat pada ruangan NICU 3 dengan nilai pencemaran sebesar 22 CFU/m3/ 30 menit untuk media agar darah dan 20 CFU/m3/ 30 menit untuk media MacConkey. Kata kunci : cemaran mikroba dalam udara, colony forming unit, NICU