Asuhan perkembangan adalah memodifikasi lingkungan neonatus yang bertujuan untuk mengurangi sensori yang berlebihan dari level kebisingan dan penerangan yang tidak adekuat. Lingkungan yang tidak sesuai dapat mengakibatkan bayi mengalami hipoksia yang sering, desaturasi oksigen, perdarahan intrakranial, dan mengalami masalah tumbuh kembang dimasa depan. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui hubungan antara pengetahuan perawat dengan aplikasi asuhan perkembangan pada neonatus di ruang NICU Rumah Sakit Umum Daerah dr. Zainoel Abidin Banda Aceh. Desain penelitian menggunakan deskriptif korelatif melalui pendekatan cross sectional study. Populasi dalam penelitian ini adalah perawat pelaksana dan neonatus yang dirawat minimal 2 hari di ruang NICU. Pengambilan sampel menggunakan teknik quota sampling dengan jumlah sampel 35 perawat pelaksana dan 40 neonatus. Pengumpulan data penelitian ini dilakukan pada tanggal 26 Mei sampai dengan 11 Juni 2015. Alat pengumpulan data berupa lembar kuesioner, lembar observasi dan lembar wawancara terpimpin. Uji statistik yang digunakan adalah uji Spearman Rho. Hasil analisis data menunjukkan bahwa tidak ada hubungan pengetahuan perawat dengan aplikasi asuhan perkembangan pada neonatus dengan nilai (P-value= 0,408). Tidak ada hubungan pengetahuan perawat dengan aplikasi proteksi tidur (P-value= 0,612), tidak ada hubungan pengetahuan dengan aplikasi pengkajian nyeri dan manajemen stres (P-value = 0,744), tidak ada hubungan pengetahuan perawat dengan aplikasi activity daily living (P-value= 0,624), tidak ada hubungan pengetahuan perawat dengan aplikasi family centered care (P-value= 0,481) dan tidak ada hubungan pengetahuan perawat dengan aplikasi lingkungan teurapeutik (P-value= 0,134). Diharapkan pada perawat perlu adanya program memperkenalkan secara khusus tentang asuhan perkembangan bagi perawat yang ditugaskan diruang NICU untuk meningkatkan kognitif dan psikomotor perawat secara berkala.