Daun sirih hijau (Piper betle L.) merupakan salah satu tanaman obat tradisional yang digunakan untuk pengobatan berbagai macam penyakit. Kemampuan sirih sebagai tanaman obat disebabkan banyaknya senyawa aktif yang terkandung di dalamnya, salah satunya adalah minyak atsiri. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh minyak atsiri daun sirih hijau (Piper betle L.) terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus dan konsentrasi yang paling efektif yang dapat menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus. Jenis penelitian adalah penelitian eksperimen laboratorium dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang terdiri dari 6 perlakuan (P0, P1, P2, P3,P4 dan P5) dan 4 kali pengulangan. Pengujian dilakukan dengan menggunakan metode difusi cakram Perlakuan terdiri dari minyak atsiri daun sirih dengan konsentrasi 10%, 30%, 50% dan 70%. Kontrol negatif (P0) menggunakan tween 80, kontrol positif (P5) menggunakan amoksisilin. Parameter yang diamati yaitu diameter zona hambat yang terbentuk. Hasil penelitian dianalisa menggunakan Analysis Of variance (ANOVA) data dilanjutkan dengan BNT (p