ABSTRAK Penelitian ini menggunakan minyak kelapa sebagai trigliserida yang akan dikonversi menjadi bahan baku biodiesel dengan menggunakan biokatalis lipase novozym 435. Tujuan dari penelitian ini untuk menemukan kondisi optimum sintesa enzimatik biodiesel dari minyak kelapa. Proses transesterifikasi berlangsung pada kondisi variasi rasio molar minyak kelapa dan metanol 1:3, 1:5, 1:7, 1:9 dan 1:11, dosis enzim 2 ; 3,5 ; 5 ; 6,5 dan 8 % w/w minyak kelapa dan waktu reaksi 15, 30, 45, 60 dan 75 jam. Pengukuran kondisi optimum penelitian dianalisis oleh program software Design Expert 8.0.7.1. Hasil analisa pengaruh variable waktu bahwa aktivitas enzim Candida amobil novozym 435 mengalami penurunan bila waktu reaksi ditingkatkan diatas 45 jam. Pada konsentrasi enzim 3,5 sampai 6,5 (% w/w minyak kelapa) yield meningkat dan mengalami penurunan ketika mencapai konsentrasi diatas 6,5 (% w/w minyak kelapa). Penurunan terjadi karena pengaruh deaktivasi enzim yang terjadi ketika pemakaian konsentrasi methanol terlalu tinggi. Hal ini juga terjadi pada tinjauan rasio minyak kelapa : methanol yang mulai mengalami penurunan produk (metil ester) pada rasio 1:7 hingga 1:11. Yield biodiesel optimum (96,62%) diperoleh pada kondisi waktu 30 jam, dengan rasio minyak kelapa dan metanol 1:5 (mol) dan konsentrasi enzim 6,5 % berat minyak. Konsentrasi ester dengan kadar yang tinggi adalah metil ester asam laurat (Lauric Acid methyl ester) yaitu sekitar 36,57 – 44,51% w/w. Kata kunci : Sintesa enzimatik biodiesel, Transesterifikasi, lipase Novozym 435