ABSTRAK Kata kunci : daun pegagan, isolasi, flavonoid, antioksidan Telah dilakukan isolasi dan uji aktivitas antioksidan senyawa flavonoid pada daun pegagan (Centella asiatica L.) untuk mengetahui turunan senyawa flavonoid dan aktivitas antioksidan pada hasil isolasi daun pegagan. Sebanyak 625 gram serbuk daun pegagan dimaserasi menggunakan pelarut etanol diperoleh 236 gram ekstrak kental etanol. Sebanyak 100 gram ekstrak kental etanol difraksinasi menggunakan pelarut etil asetat diperoleh 37 gram ekstrak kental etil asetat. Uji skrining fitokimia ekstrak kental etanol dan etil asetat daun pegagan menunjukkan positif adanya senyawa flavonoid. Pada uji KLT didapatkan eluen terbaik yaitu kloroform:metanol (9:1) v/v untuk pemisahan senyawa flavonoid menggunakan kromatografi kolom sehingga diperoleh 116 fraksi etanol dan 136 fraksi etil asetat, kemudian dilakukan uji KLT untuk penggabungan fraksi. Masing-masing fraksi gabungan etanol dan etil asetat daun pegagan diuji skrining fitokimia dan KLT sehingga fraksi yang mengandung senyawa flavonoid dipekatkan dan diperoleh 4 dan 4,8 gram isolat etanol dan etil asetat daun pegagan. Hasil spektrum IR isolat etanol daun pegagan memberikan serapan didaerah 3397,540; 2976,829; 1636,989; 1447,170; 1215,653; 1026,496 dan 778,261 cm-1. Analisis spektrum IR isolat etil asetat daun pegagan memberikan serapan didaerah 3463,591; 2976,890; 1727,613; 1445,781; 1243,318; 990,984 dan 789,872 cm-1. Berdasarkan hasil analisis spektrum IR isolat etanol dan etil asetat daun pegagan terdapat gugus O-H, C-H alifatik, C=C aromatik, C=O, C-O dan C-H aromatik sehingga pada daun pegagan diduga mengandung senyawa luteolin turunan senyawa flavon. Uji aktivitas antioksidan pada massa 50 mg masing-masing isolat etanol dan etil asetat daun pegagan diperoleh 19,57 dan 18,00 mg total fenol dan persentase reducing power sebesar 21,24 dan 19,49%.