Penelitian ini bertujuan mengisolasi dan mengidentifikasi bakteri salmonella sp pada limpa ayam layer jantan yang mati di peternakan sibreh, aceh besar. sampel penelitian yang digunakan adalah organ limpa ayam layer jantan. isolasi salmonella sp dilakukan dengan menginokulasi organ limpa yang di tusuk menggunakan swab pada media selenite cystine broth (scb) kemudian ditumbuhkan pada media selektif salmonella shigella agar (ssa) dan diamati morfologi koloni, dilanjutkan pengamatan secara mikroskopis dengan pewarnaan gram. selanjutnya koloni yang dicurigai salmonella sp ditanam pada media mr-vp (oxoid), indol (difco), simmons’s citrate agar (oxoid), triple sugar iron agar (tsia), sulfit indol motility (sim), dan media gula-gula (sukrosa, manitol, glukosa, laktosa, maltosa). hasil penelitian ini dianalisis secara deskriptif. hasil pemeriksaan dari total 33 sampel ditemukan bahwa 15 sample positif dapat di isolasi dan di identifikasi salmonella sp. oleh karena itu dapat disimpulkan bahwa